要点

描述

原理

在压力下产生的湿热的蒸汽杀死微生物的营养体和孢子。 

密封

灭菌锅必须密闭以阻隔外部空气， 避免空气的存在会影响压力并降低灭菌锅里面的温度。

灭菌压力

在灭菌锅内， 合适的灭菌温度是通过压力达到的， 压力对于灭菌没有效用但是使蒸汽温度上升。 对于标准操作来说，15lbs/inch2时的121℃并赶走所有空气可以达到灭菌的效果。

灭菌时间

当到达一定的温度和压力时， 需要保持一定的时间来达到效果，为了杀灭微生物，121℃必须保持至少15分钟。

培养基灭菌

大部分情况下，  配置培养基后应灭菌，灭菌时应根据供应商指导， 使用合适的温度时间； 有些培养基不适合灭菌的。

器皿灭菌

当灭菌器皿时，需要考虑使用数量，比如，一天用10根吸管，在灭菌时， 一般就可以以10根为一包， 这样可以减低器皿在使用过程中遭受微生物的污染的可能性。

灭菌条

在灭菌过程中， 可以用灭菌条来监控效果， 灭菌条在灭菌前是有颜色的，灭菌后会变成黑色。

重新灭菌

假如一次灭菌无效， 可以重新进行灭菌过程， 但是，培养基是不可以进行第二次灭菌的， 应抛弃。

储存

灭菌完成后， 培养基和器皿应妥善储存。 一般来说， 培养基应存放于避光的洁净空间，同时应参照供应商的指示。

通风和气流

安保

工作区域

微生物 应该有单独的通风系统, 与其他操作区域的空气供给分开；

空调系统的排气必须直接排出 , 空调系统应定时清洗, 并关注空气过滤器的清洁。

应该是限制进入的, 可以是卡片控制或者其他方式, 只有那些被允许进入 的人员才能进入。

人员应该有充足的工作区域, 从GLP标准来说, 每人应有20平方米的区域. 充足的工作区域可以避免工作中人员的碰撞, 也避免了交叉污染。

易清洁

照明

反馈

的墙面, 屋顶和门都应该是平滑的, 光洁易于清洗消毒的；

墙的接缝包括强和墙之间, 强和地面之间应该是弧形的；

任何地方都应该不能聚集灰尘, 例如窗台或者窗帘；

柜子应该是可移动的或者是不着地的以方便清扫。

应有充足的照明, 包括不间断电源或者备用发电机. 

反馈

遵照GLP相关的安全规则

要点

描述

总体安排

实验前应做好仪器, 试剂和培养基的所有准备工作, 这样可以合理利用时间并得到稳定的实验结果。

桌面安放

多余的培养皿, 烧瓶或者滤纸可能会干扰实验并带来潜在的溅出, 打碎或者交叉污染。

实验前消毒

在配制培养基或者开始试验前, 应该清洁并消毒工作桌面。 可以采用70%的酒精溶液, 含氯水的溶液, 或者其他消毒剂。清洁后, 应等待几分钟以使有充分的时间杀灭微生物。

试验后消毒

实验结束后, 彻底清洁工作区域, 仍然使用70%酒精溶液或者其他消毒剂, 保持一段时间, 然后擦干。

有害废弃物的处置

必须有效管理微生物的有毒废弃物, 任何和微生物培养或者培养基相关的物品都应被看作有害物质;  因为他们可能含有致病菌, 需要小心处理。

废弃物的灭菌

湿热灭菌是最简单也是最有效的处理污染物质和有害物质的方法。 用过的培养皿应放在灭菌袋中。 灭菌后, 可以当作一般废弃物处理。

重复使用器皿的灭菌

当需要对小件物品(比如移液管)灭菌时, 可以根据实际用量分组包装。 湿热灭菌后, 袋包装冷却并保存。

避免浪费

合理安排是非常重要的;  工作需要精准, 但是有时候我们也需要快速工作, 因为花非常多时间会延长设备, 培养基, 或者样品暴露在环境中的时间。 把需要用的物品放在手边可以用的地方可以节约时间并提高工作的有效性。

简介

使用

监控

洁净工作台提供了控制来自环境的污染并提供工作区域的洁净空气. 洁净空气吹向工作区域, 同时, 可以避免外部空气进入工作区域

使用时, 紫外光线(或者紫外灯)应关闭, 但是使用后应打开. 如果紫外灯没有打开工作台没有开启, 工作台不能开始使用; 必须清洁工作台, 开启电源并打开紫外灯, 保持30分钟. 

洁净工作台需要进行日常的确认, 一般有第三方公司进行

一个有效的

安全用品

移动

安全用品包含口罩, 手套和眼部防护。 

口罩防止培养基和样品受到污染, 可能来自于咳嗽或者鼻涕; 根据当地的要求和习惯, 每个 会有不同的要求。

戴手套是为了防止培养基或者其他刺激性物质接触皮肤; 在从湿热灭菌锅内取出容器或则器皿时, 需要戴防热手套。

在配置培养基和实验中佩戴防护眼镜是一个很好的习惯, 能够购买带有屈光度的防护眼镜为佳。

当移动培养基或者样品时, 应小心注意以避免溅出或者泼出；

突然的移动会产生安全危害或者导致实验无效；

不要使用夸张的动作或者行为

同时, 不要把任何东西, 比如吸管, 放到嘴里。

 明火

湿热灭菌锅

实验中需要用到酒精灯或其他明火, 但是假如使用不当会带来比较高的安全危险；

确保酒精灯不用时完全关闭, 当有阀门时经常检查垫圈是否有裂痕或者泄露；

操作酒精灯时, 应确保火焰不会接触衣物或者皮肤. 可燃物品, 比如记录本, 应远离火焰以避免意外点燃；

同时, 要注意可燃液体的容器. 每次使用后应盖好盖子并远离酒精灯火焰；

使用火焰进行灭菌工作时, 可使用镊子. 把镊子放在含有95%酒精的烧杯中, 使用时, 把镊子在火焰上灼烧1-2秒, 移开镊子并等待火焰熄灭； 

拿着镊子是尖端应向下, 使热的酒精不会流到手上。

湿热灭菌锅使用高压下产生的蒸汽, 温度可达1210C,  杀死了微生物, 同样可以带来人类组织的灼伤, 所以必须特别小心地操作; 

如此高的温度以及蒸汽能带来极大的潜在伤害, 即使是残留的蒸汽也能带来很大的危险. 打开灭菌锅时需要特别小心, 站在边上避免面对热量和蒸汽, 缓慢的打开门, 同时, 戴好防热手套. 

把需要灭菌的培养基和器皿平均放置在托盘上, 大的物品放在边上, 确保物品不会相互碰撞. 这样可以是热量均匀扩散并平衡整个托盘

洁净台

样品操作

在洁净台工作时必须关闭紫外灯. 紫外光线是危险的；

不要把手或者手指放在紫外灯下, 以免灼伤皮肤；

不要直接看紫外光线以免损伤眼睛。

培养基和样品: 用火焰灼烧瓶口时, 停留4-5秒, 旋转使整个表面都能被灼烧, 不要停留太久, 不要溅出样品或者培养基；

假如样品是瓶装的, 不要直接灼烧以免爆开. 可以取2个烧杯, 倒入70%酒精, 把瓶子倒置放入一个烧杯中, 使盖子和瓶颈的2.5厘米处能浸没在酒精中, 拿出瓶子用干净的布擦干; 同理, 放入第二个烧杯, 拿出瓶子直立待酒精自然蒸发；

开瓶时应特别小心不能污染样品, 可以用消毒纸巾开旋盖的瓶子; 用浸没在95%酒精并灼烧的开瓶器打开压盖瓶；

打开瓶子后, 使用相同的方法灼烧瓶口, 并确保用于消毒的酒精完全挥发；

拉罐可以使用相同的程序或者用含70%酒精的棉球擦拭顶部, 假如罐子必须用开罐器, 这个开罐器操作同开瓶器；

无菌包装的产品用含70%酒精的棉球擦拭。

微生物防护用具