液相色谱压力异常怎么办？
液相色谱压力异常
1、影响因素
影响系统压力的因素主要有流动相的溶剂组成、温度及流速这三方面：
1）流动相的粘度是产生反压的主要原因，下图为有机溶剂-水的粘度随组成与压力的关系图：
由上图可以看到，乙腈-水比例为（20:80）、甲醇-水比例为（40:60至50:50）时，系统的压力最大。因此，在做实验时应尽量避开这个比例范围。另外，异丙醇粘度大，一般不作流动相使用。
2）流速对反压的影响是线性关系，流速增加，反压亦增大。
3）温度对反压的影响是反比关系，温度升高，反压降低，对某些流动相的影响更大一些。
4）液相色谱仪各模块之间的连接管路也会产生压力，系统压力与管路的长度成正比，与管路直径的四次方成反比（1/4D）。上述考虑的是柱外因素对系统压力的影响， 对系统压力的影响也很大，反压与 长度成正比，与填料颗粒度的平方成反比（2.5μｍ填料比3.5μｍ填料反压高）。
２、压力原因
具体到压力问题的表现形式上，主要有压力高、压力低或没有压力以及压力不稳：
①造成压力高问题的主要原因有：
1）温度太低；
2）流速太高；
3）流动相粘度大；
4）管路堵塞；
5）仪器或 堵塞；
6）压力传感器问题。
系统压力高的故障排除流程图如下：
②产生压力低情况的可能原因：
1）系统内有渗漏处；
2）单向阀堵塞；
3）入口管路有气泡；
4）溶剂滤头堵塞；
5）所用溶剂不正确，储液瓶中无溶剂；
6）温度太高，流速太低；
7）泵未输送流动相；
8）泵关闭或保险丝断了。
以上为仪器单向阀的结构示意图，如果某些原因造成宝石球与球基座发生黏结，造成液体不能进入到泵中，从而造成泵的压力偏低。
3、造成压力波动可能的原因有：
1）脱气机排气不充分；
2）流动相未正确脱气；
3）所用溶剂不混溶或易挥发；
4）压力传感器及泵问题。
其中，大多数的压力波动都是由于气泡引起的（如下图）：
基线噪音问题
1、基线噪音大
1）流动相中有气体——溶剂脱气；
2）流动池中有气泡——在出口处使用0.009的管路；
3） 上的污染物被洗脱——平衡系统，直至基线稳定；如样品中有保留非常强的组分，可设置强洗脱程序；
4）渗漏——此时应修复渗漏，重新连接或更换接头；
5）检测器灯能量低——更换灯；
6）灵敏度太高——使用合适的采样频率，调节增益（如ELSD检测器）；
7）检测器流动池脏——清洁流动池；
8）电噪音——除去电噪音的来源：屏蔽电缆，清洁触点；
9）采样频率设置过大——一味追求高采样频率，可能对灵敏度没有任何帮助，同时也会产生比较大的噪音：UV检测器推荐降低采样频率，HPLC推荐1-5Hz，UPLC推荐20Hz。
2、同步的基线噪音
1）大多数情况下都是泵引起的，泵头中存在空气——将溶剂脱气，并重新灌注泵；
2）单向阀问题——超声清洗单向阀或更换；
3）柱塞杆断裂——更换；
4）混合问题——更换一个体积更大的Mixer，以增加系统体积；
5）电噪音——改变电路，除去来源。
3、不同步的基线噪音
1）气泡——流动相要脱气；
2）检测器中有气泡／空气——流动相脱气，或在检测器的后面加反压（不适用于RI检测器）；
3）渗漏——特别是肉眼无法发现的微漏或者泵的内漏，会造成流速的变化和混合比例的变化，从而导致基线噪音，此时应修复渗漏，重新连接或更换接头；
4）管路堵塞——除去堵塞，冲洗系统；
5）电噪音——除去来源，改变电路。
4、基线漂移：上漂或者下漂
1）梯度变化引起，如溶剂Ｂ的吸收值高于溶剂A——使用基线差减，或尝试新的流动相；
2）化合物从 上洗脱——平衡系统，直至基线稳定；如样品中有保留非常强的组分，可设置强洗脱程序；
3）溶剂改变（气体吸附，蒸发）——氦气脱气，隔离溶剂；
4）溶剂渗漏——拧紧或者更换接头；
5）检测器温度影响（尤其是示差，电化学以及电导检测器）——流动池温度调节；
6）柱温波动——等待柱温平稳，使用柱预加热器；
7）压力变化——过滤溶剂以及样品，或样品太粘稠；
8）混合问题——更换一个体积更大的Mixer，以增加系统体积。
5、Cyclic基线
1）温度影响——隔离热源，或搬离临近的通风口，或增加流动池温度；
2）混合问题——更换一个体积更大的Mixer，以增加系统体积；
3）流动相中的气体——溶剂脱气；
4）泵不稳定——检查维修泵；
5）管路堵塞——冲洗系统，排除并除去堵塞源头；
6）电问题——改变电路，或除去根源。
6、基线上的毛刺
1）气泡——溶剂脱气，并重新灌注泵，流动相脱气越好，基线就会越好；
2）信号连接不好，连线变松——清洁并拧紧检测器上的导线，或检查连线是否有损坏，或更换铲形接线片；
3）灯继电器试图点燃熄灭的灯——更换灯；
4）电噪音——更换电路，或除去根源。
7、小结
1）确保无电源及电噪音干扰；
2）为避免基线噪音，确保仪器系统内无气泡或空气，流动相首选过滤脱气；排尽管路、进样器、检测池中的气泡；选择合适的接头和管路，防止渗漏；
3）在编辑方法时，针对HPLC和UPLC仪器UV检测器设置合适的采样频率，HPLC推荐1-5Hz，UPLC推荐20Hz；4）保持良好的操作习惯，如UPLC仪器水相流动相每天更换，添加了缓冲盐的流动相过0.2μｍ溶剂过滤膜等，都会减小基线噪音的产生。
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