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张明 0 2024-01-09

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LC中引起的异常怎么处理？

异常与解决方法

柱压与硅胶基质的形态(如无定形或球形硅胶)、颗粒大小、填料合成条件、装柱条件、所用流动相和分析时的温度有关。

不同厂家的柱压会有所差别，相同流动相和温度的条件下，不同厂家的新有的柱压可能相差4、5个MPa，特别是低端和高端之间，这一区别比较明显。这是由厂家所选用的硅胶基质及其生产条件决定的，这种差异的存在是正常的。

同时需要说明的一点是，柱压与柱效有一定的关系，通常柱效高的柱压相对而言会高一点，但柱压高的并不一定就具有高柱效。

在的使用过程中柱压通常会出现两种升高的形式：

第一种是，随着使用时间的延长柱压慢慢上升，这是正常的；

第二种是，使用过程中(流动相和温度没有改变的条件下) 压力突然升高很多。这种压力突然升高的现象，通常是由工作人员操作不当引起的。

原因：

解决办法对于第二种，即柱压突然升高的情况，通常有以下几种解决办法：

将反接，用含水比例较大的流动相进行冲洗。
进样一端的筛板取下，分别放在水中和甲醇中超声或更换新的柱筛板。如果柱效没变，但柱压仍然较高，则应考虑进样端填料受污染的问题，因此除了取下进样端筛板超声外，还需要挖掉进样端的部分填料，挖去填料之前先检查一下填料的颜色，如果填料的颜色发生了变化，则应该挖掉直到见到白色的填料为止。

挖掉后将出现一个缺口，填补缺口的填料可以从另一支相同品牌、相同型号的报废的出口端获得，填料用有机溶剂如甲醇等调成糊状装入缺口处，压紧刮平，再装上筛板。

使用经验

在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。

但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。

1. 样品的前处理

a. 最好使用流动相溶解样品。

b. 使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。

c. 使用0.45µm的过滤膜过滤除去微粒杂质。

2. 流动相的配制

液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：

3. 流动相流速的选择

因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。

对于一根特定的，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的，流速一般选择1ml/min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml/min为佳。当选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。

注意

由于甲醇廉价，对于反相柱推荐使用甲醇体系(必须使用乙腈的场合除外)。
对于正相柱推荐使用沸程为30-60℃的石油醚或提纯后的己烷作流动相，没有提纯的己烷不得使用。用水最好使用超纯水(电阻率大于18兆欧)，去离子水及双蒸水中含有酚类杂质，有可能影响分析结果。
含水流动相最*在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜。最好加入叠氮化钠，防止细菌生长。
流动相要求使用0.45 µm滤膜过滤，除去微粒杂质。
使用HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长的使用寿命，提高柱性能。