小耗材大智慧之液相

老赵头 0 2020-09-09

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在液相系统中起着分离的作用，是液相色谱系统的核心部件之一。柱管材质有玻璃、不锈钢、铝铜、peek以及内衬光滑的聚合材料的其他材质。一般细粒度的填料采用匀浆填充法装柱，先将填料调成匀浆，在高压泵作用下，快速将其压入装有洗脱液的内，经冲洗后备用。

　　老赵头上学的时候也装过层析柱，由于技术不过关，装出来的柱子里面经常有气泡，实验效果不好。柱子装填的效果对柱效影响很大。如何使用使实验顺利进行，这就需要对做一下深入的了解了。

　　一、液相结构

　　一般的液相由柱管、柱头螺母、死堵、筛板、还有里面的填料组成。不同品牌的构造略有不同。

　　二、液相的分类

　　液相分类多样主要有以下分类方式

　　按照固定相基质分：无机氧化物(常用硅胶、氧化铝)、聚合物基质(常用DVB、PS-DVB、PHAM等)和全石墨化碳等。

　　按结构和形状分：全多孔硅胶柱和核壳柱，无定型和球形，整体柱

　　按分离模式分：正相、反相、离子交换、体积排阻、亲和、手性等

　　按照分离规模和尺寸分：制备柱、分析柱、微型柱、毛细管柱等。

　　三、柱性能评价

　　的类型和构型(粒径、内径、长度、碳载量、孔径等)选择通常有分离的目的决定，对特定类型的，不同品牌不同系列之间差异很大。表征性能的参数主要有：理论塔板数、不对称因子、对两种不同溶质的选择性、的反压、保留时间的重现性、键和相浓度、的稳定性等。一般出厂COA报告包含其中比较关键的项目。

　　四、常用

　　我们常见的品牌有waters、安捷伦、赛默飞、岛津、shodex、大赛璐、还有被大曹三耀收购的资生堂，国内品牌比较出名的就是月旭、依利特了。

　　我们再看看各种各样的键和相都是啥。

　　这么多的键和相到底应该怎么选，有没有规律呢，必须有啊，往下瞅瞅。

　　又想起了化学老师那句万能的箴言：“结构决定性质，性质决定用途。”结构和性质还决定了这伙计需要用什么柱子分离。

　　了解被分离物有何区别?有无可电离集团?电离常数?PH如何影响色谱分析?比如下图PH对分离的影响。

　　常规的硅胶基质不能耐受高PH，可以选择杂化硅胶颗粒或者聚合物基质的，多点键和的在高PH下也会比单点键和的寿命更长。下图便是某位小姐姐家的在高PH下硅胶溶解的图片。

　　五、如何更好的使用，延长柱寿命?

　　1、拿到后先阅读说明书，了解的具体性能：耐受温度、耐受PH等。以及的冲洗和保存条件。经过柱校测试确认本身没有问题后方可正常使用。

　　2、样品充分前处理，确保样品的洁净;使用保护柱或在线过滤器，根据实际情况更换保护柱芯或滤片。

　　3、避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。

　　4、应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中如果流动相中使用了缓冲盐，避免出现盐析。

　　5、选择使用适宜的流动相(尤其是pH)，以避免固定相被破坏，PH过低共价键断裂，键和相水解;PH过高硅胶溶解。

　　6、使用过程中，如果压力升高，或出现污染，选择适当的条件冲洗或反冲。

　　适用于C18、C8、C4、C1、苯基、PFP、AQ等

　　使用至少20倍柱体积的含有≥30%谁的极性邮寄溶剂(如乙腈)作为流动相除去柱子中的缓冲盐;使用至少20倍柱体积的含有95%极性邮寄溶剂(如乙腈)冲洗。

　　污染物的去除常规星期后柱校没有明显恢复时，使用50%异丙醇/乙腈以低流速清洗20倍柱体积以除去污染物。(以上操作可根据自身SOP视情况而定，此方法仅为赛默飞针对自己品牌的反相冲洗的参考意见)

　　适用于氨基柱、氰基柱

　　常规清洗：乙腈：水=60;40条件对进行冲洗，清洗时不建议水相比例超过40%，过高使用水相容易导致键和相水解。

　　再生：当经过长期使用，柱校降低时，可以对进行再生，乙腈：水(水中加入0.05%氨水)=60:40条件冲洗30倍柱体积。(以上操作可根据自身SOP视情况而定，此方法仅为赛默飞针对自己品牌的冲洗的参考意见)

　　适用于离子交换柱SCX、SAX冲洗方法

　　日常冲洗：用100%水冲洗30个柱体积除盐，然后用20%甲醇或乙腈冲洗20个柱体积后保存在20%甲醇或乙腈中。

　　长期保存：用100%水冲洗30个柱体积去除盐，然后用50%乙腈;50%水冲洗20个柱体积后保存在50%乙腈：50%水中。

　　再生：先用高浓度的缓冲盐(不超过1M)，然后再用100%水洗，100%乙腈或甲醇冲洗，再用20%乙腈或甲醇保存。(以上操作可根据自身SOP视情况而定，此方法仅为赛默飞针对自己品牌的冲洗的参考意见)

　　是个很厉害的角色，

　　希望有机会我们一起探讨!

内容来源：实验与分析

责任编辑：展源

审　　核：何发