分析脂溶性维生素的高效方法 -

分析脂溶性维生素的高效方法

Franziska Chmelka，Mariia Mathoviskaia和Norbert 0 2020-05-27

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测定脂溶性维生素可能是耗时的，但它不一定是。通过智能样品制备策略和正确的技术，脂溶性维生素可以通过多种方法有效检测和测量。这里的关键是固相萃取(SPE)。

　　测定脂溶性维生素可能是耗时的，但是通过智能样品制备策略和正确的技术可以提高效率，脂溶性维生素可以通过多种方法有效检测和测量。这里的关键是固相萃取(SPE)。

　　我们依靠吸收某些有机化合物，因为我们的有机体需要它们生存，但无法自身合成。除了少数例外，维生素是我们必需的物质之一。为了满足建议的日常需求，我们不仅需要了解个人需求。食品制造商需要确定和申报其产品的营养成分。这同样适用于非处方膳食补充剂的生产者。

　　经典的维生素分析是费力的

　　测定食物或补充剂中的维生素，尤其是脂溶性维生素E，D，K和A的含量是微不足道的。由于它们的亲脂特性，它们只能用非极性溶剂如乙酸乙酯或己烷从基质中提取。用于所需的反相色谱但是使用的是或多或少极性的，例如乙腈，甲醇和水。也就是说，谁想通过HPLC分析确定脂溶性维生素的种类和用量，都不能避免溶剂的变化。手动完成此步骤通常需要大量时间和精力。分析脂溶性维生素时，另外两个方面证明是具有挑战性的。一方面，脂肪在提取过程中被带走并加入到样品提取物中; 然而，脂肪会干扰后来的HPLC分析，因此需要分离。另一点是样品中维生素含量通常很低，这使得难以达到检出限。

　　可见的优化潜力

　　然而，如果您想提高分析脂溶性维生素以提高生产力和灵敏度的有效性，那么您就可以扭转局面，您会发现它很有用并具有开创性，可以释放您的优化潜力。

　　这正是TeLA(Bremerhaven技术食品与环境分析)的目标。在工作中已经有一个有趣的方法出现了开头，最终导致多方法，通过它在这种情况下的维生素d在第一时间，K和E自动化的发展，并让更多的脂溶性维生素，确定一个单一的分析运行。

　　等等形成的碱，自动进样器的夹杂物来自动化需要，通常消耗样品制备步骤，特别是样品提取物和溶剂交换提纯简化它并作出可能的独立人员的。

　　自动SPE使差异

　　在这种情况下，一个关键的位置是固相萃取(SPE)，这是去除样品提取物中的逃逸脂肪的任务。SPE以及样品制备和样品应用的所有进一步步骤均在Gerstel多目的采样器(MPS)上以双头版本自动进行。这种类型的采样器已经在各种应用中得到了证明。MPS还提供了本申请中需要的各种有趣选项，包括能够以不同量来分散不同量的溶剂，而不必更换工具，或者将样品提取物蒸发并干燥并且在兼容HPLC的溶剂中恢复，

　　脂溶性维生素的含量在振兴牛奶混合饮料和膳食补充剂中进行了研究。将样品均质化，用乙酸乙酯萃取并离心。所得上清液用于随后的分析。

　　在实践中成功使用

　　经过一系列有利的实验后，发现以下用于测定脂溶性维生素的方法是良好的并且在常规分析中确定：

安捷伦科技公司的Agilent 1290 HPLC和6495三重串联四极杆质谱仪组成的LC / MS系统

　　MPS通过向C18吸附剂中加入甲醇和乙酸乙酯来调节SPE柱。随后，加入2毫升样品提取物以确保吸附剂上不残留甲醇或乙酸乙酯。丢弃所得到的提取物。然后再投入5毫升样品提取物。所得到的溶液被收集在多位置蒸发站(mVAP)蒸发至干燥，将残余物溶于乙腈并加入柱中分析。由安捷伦科技公司的Agilent 1290 HPLC和6495三重串联四极杆质谱仪组成的LC / MS系统用于分析(见图2)。使用溶剂梯度(A：5mM甲酸，B：甲醇，流量：0.5mL，55℃)并且固定相是C18反相材料。以正APCI模式检测。

图3：维生素混合物标准的色谱图。在第九和第十二分钟之间清晰地分离信号。

　　超过九分钟后，第一个信号(D2)出现在色谱图中，最后一个信号(十一分钟后)(K1)(见图3)。总而言之，峰值被充分分离并被良好评估。比赛在17分钟后停止。这证明可以使用本发明的HPLC-MS / MS方法以高灵敏度和干净分离的运行在最佳条件下检测上述三种上述脂溶性维生素。

　　此外，比较测量表明，涉及固相萃取的分析(显着更高的灵敏度)与无显着差异。此外，能够进行样品前处理和分析的时间(预备功能)，使测量显着加速：第一个样品的准备和测定需要41分钟，每个额外的样品需要不超过24分钟的测量结果。

图4：具有和不具有固相萃取的天然生育酚含量低的样品的分析比较：在多维分析中使用自动SPE的清晰信号。

　　最后但并非最不重要的是，测量值与声明中的信息进行了比较。在混合奶饮料中，维生素E衍生物生育酚乙酸酯的检出量为174μg/ g，为200μg/ g。对于膳食补充剂，声明显示5.0μg/ g维生素K1和1.8μg/ g维生素D3。测量值为4.6微克/克K1和1.5微克/克D3。这意味着在回收方面，此处介绍的HPLC-MS / MS方法可满足最高要求。自动化也导致了良好的重复性。

内容来源：实验与分析

责任编辑：展源

审　　核：何发

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