大观霉素、庆大霉素、新霉素、链霉素四联试纸条检测效果评价

本文主要对大观霉素、庆大霉素、新霉素、链霉素四联胶体金快速检测试纸条的检测限、特异性、重复性、假阳性率、假阴性率以及影响胶体金检测效果的主要因素等方面进行了评价。

大观霉素、庆大霉素、新霉素、链霉素四联胶体金快速检测试纸条，是以胶体金技术和免疫层析技术相结合，可一次检测4 种抗生素的快速检测产品。广泛地应用于牛奶中抗生素的筛查，不需要仪器和设备，在10min 内就能检测出结果。本文主要研究使用快速试纸条对牛奶中的抗生素进行快速检测。

实验部分

实验材料

大观霉素、庆大霉素、新霉素、链霉素四联胶体金快速检测试纸条(勤邦生物技术公司)：牛奶购自超市;大观霉素、庆大霉素、新霉素、链霉素及其他抗生素标准品(sigma)。

检测方法与结果判断

吸取200 μl 待检牛奶样品于冻存有胶体金标记抗体的微孔中，缓慢抽吸至与微孔中试剂充分混匀。将试纸条插入印有“MAX”线端朝下，使之完全浸入溶液中。20~25℃孵育5 min 后，取出试纸条观察颜色，判定结果。

阴性(-)：C 线显色，T 线均显色，无论颜色深浅，均表示牛奶样本中大观霉素、庆大霉素、新霉素、链霉素浓度均低于检测限。阳性(+)：C 线显色时，T1 线不显色，表示大观霉素浓度大于等于检测限;T2 线不显色，表示链霉素浓庆大霉素浓度大于等于检测限;T4 线不显色，表示新霉素浓度等于或高于检测限;未出现C 线，表明试纸条已失效。

图1. 试纸条结果判定。

最低检测限试验

将不同浓度的大观霉素、庆大霉素、新霉素、链霉素标准品添加的牛奶样品分为5 组，每组样品10 份， 大观霉素、庆大霉素浓度分别为5、10、15、20、25 μg/L ;新霉素各组浓度分别为200、300、400、500、600 μg/L ;链霉素各组浓度分别为20、40、60、80、100 μg/L，分别用试纸条检测，5 min 后观察结果。

特异性试验

将牛奶中常见的其他抗生素(青霉素G、头孢洛宁、四环素等)添加到阴性牛奶样品中，使其终浓度为500 μg/L，用试纸条重复检测5 次，5 min 后观察结果。

重复性试验

分别取添加大观霉素、庆大霉素各20 μg/L、新霉素500 μg/L、链霉素80 μg/L 标准品的阳性牛奶和阴性牛奶各1 份，分别用试纸条进行重复检测20次，5 min 后观察结果。

不同温、湿度检测

分别取添加大观霉素、庆大霉素各20 μg/L、新霉素500 μg/L、链霉素80 μg/L 标准品的阳性牛奶和阴牛奶各5份，分别在室温(25℃)、培养箱(37℃)和冰箱(4℃)，在气候箱中相对湿度为30~40%， 60~70%，85~90% 时用试纸条进行检测， 5 min 后观察结果。

假阳性、阴性率

随机取阴性牛奶样品50 份， 用试纸条检测，5 min 后观察结果，以考察试纸条的假阳性率;随机取添加大观霉素、庆大霉素各20 μg/L、新霉素500 μg/L、链霉素80 μg/L 标准品的阳性牛奶样品50 份，用试纸条检测，5 min后观察结果，以考查试纸条的假阴性率。

检测结果与分析

试纸条最低检测限

牛奶中大观霉素含量、庆大霉素含量<15 μg/L 时，均出现阴性结果，大于等于20 μg/L 时，均出现阳性结果，15 μg/L 时，检测10 份样品中有1 份出现阳性结果，抑制率为10% ;新霉素含量≤ 400 μg/L 时，均出现阴性结果，大于等于500 μg/L 时，均出现阳性结果;链霉素含量≤ 60 μg/L 时，均出现阴性结果≥ 80 μg/L 时，均出现阳性结果。在本试验条件下试纸条的最低检测限规定为：大观霉素20 μg/L、庆大霉素20 μg/L、新霉素500 μg/L、链霉素80 μg/L。

表1. 不同浓度抗生素牛奶检测结果

表2. 试纸条重复性检测

表3. 温度的影响试验

表4. 湿度的影响试验

特异性试验

分别对添加500 μg/L 青霉素G、头孢洛宁、四环素、红霉素、林可霉素、氯霉素、磺胺二甲基嘧啶的牛奶样品检测时，检测线和质控线均显色，结果为阴性，所以试纸条特异性较好。

重复性试验

表2 结果显示，所检样品中，只有1 份样品进行庆大霉素检测时出现阳性结果，总体阴性牛奶与阳性牛奶重复检测结果均一，表明该试纸条重现性较好。

温、湿度的影响

表3、4 结果表明，在25℃或相对湿度60~70% 进行检测，未出现假阳性或假阴性结果;在37℃、4℃或相对湿度30~40% 和85~90% 时，出现假阳性或假阴性结果， 相对湿度85~90% 时，影响显著。

假阳性、阴性率试验

检测50 份阴性牛奶，结果有48 份呈阴性，2 份呈阳性，即假阳性率为4%;检测50 份阳性牛奶， 结果均呈阳性。

小结

大观霉素、庆大霉素、新霉素、链霉素四联胶体金快速检测试纸条大大地提高了检测效率，十分适合现场快速检测。尽管此法目前只能达到半定量，但作为一种快速筛查的手段可以有效地弥补基层单位因设备和经费问题而导致的检测方法的缺陷。